Desta forma, a atividade proposta visa comparar sequências de DNA normais e mutantes, identificar os erros genéticos com auxílio de enzimas de restrição, e explorar ferramentas para aprimorar a biotecnologia na área da saúde.
Fonte: o professor.
ATIVIDADE
ETAPA 1: Levantamento e análise de dados genéticos
Considere duas sequências de DNA, uma original (Código 1) e uma alterada (Código 2):
Código 1: GGTAGAAGTACCTACTGTCAG
Código 2: GAATTCGGTAGAAGTACCTACTGTCAG
Siga o passo a passo descrito abaixo e depois responda às questões:
1º passo: Copie a sequência (linha) do código 1 e vá até o site https://nc3.neb.com/NEBcutter/prj/ . Cole o código 1 no campo: “1. Input or choose sequence” e sem alterar nenhum outro campo, clique em “Submit”.
2ª passo: Tire um print da tela do site, da imagem do código com as enzimas de restrições apresentadas, como no exemplo abaixo e cole no campo correspondente, no formulário de resposta (questão 1.2).
3º passo: Note que para cada enzima de restrição, há uma região de reconhecimento e a seta indica onde ocorrerá o corte no material genético. Anote as enzimas sugeridas para cortar o fragmento de DNA. Anote, além das enzimas, os seus respectivos locais de corte (p.ex. entre A/C) (questão 1.3).
4º passo: Repita os passos 1,2 e 3 para o Código 2, clicando em “Create New Project”.
Com base nos dados acima, RESPONDA às questões abaixo:
1.1) Analise as sequencias dos Códigos 1 e 2. REALÇE a diferença entre as duas sequências de DNA, sublinhando ou circulando as bases. DESCREVA a diferença entre as sequencias.
Código 1: GGTAGAAGTACCTACTGTCAG
Código 2: GAATTCGGTAGAAGTACCTACTGTCAG
1.2) INSIRA as imagens do site (2º passo) dos Códigos 1 e 2, com as enzimas de restrições apresentadas.
1.3) LISTE, para os Códigos 1 e 2, cada enzima sugerida no software para o corte o fragmento de DNA, com os seus respectivos locais de corte (p.ex. entre A/C).
ETAPA 2: Interpretação e discussão de resultados
Agora, de acordo com os conteúdos trabalhados na disciplina e com as informações coletadas na etapa 1, RESPONDA as questões abaixo:
2.1) A enzima de restrição MspJI foi selecionada para o experimento. QUAIS serão os dois fragmentos gerados pela clivagem do Código 2 por esta enzima.
2.2) Considerando que a transcrição é feita a partir da fita codificadora, ANOTE a sequência inversa e complementar da filta molde para os fragmentos 1 e 2. (Dica: você pode utilizar um software como https://www.bioinformatics.org/sms/rev_comp.html para esta etapa).
2.3) A partir da sequência da fita codificante dos fragmentos 1 e 2 (questão 2.2), e observando o exemplo apresentado realize:
1º: A TRANSCRIÇÃO das sequências, seguindo a regra de pareamento de bases complementares (DNA fita codificante em mRNA);
2º: A TRADUÇÃO das fitas de mRNA com base nas informações contidas na Figura 1 (trincas de mRNA para aminoácidos);
3º: Por fim, DESCREVA como será a composição de cadeia de aminoácidos expressada.
EXEMPLO:
DNA Fita molde: GGTCAAGCTAATAAGGGCTAAAGC
Fita Codificante (Fita Complementar Inversa): GCTTTAGCCCTTATTAGCTTGACC
Transcrição:
mRNA: GCUUUAGCCCUUAUUAGCUUGACC
Tradução:
GCU → Ala (Alanina)
UUA → Leu (Leucina)
GCC → Ala (Alanina)
CUU → Leu (Leucina)
AUU → Ile (Isoleucina)
AGC → Ser (Serina)
UUG → Leu (Leucina)
ACC → Tre (Treonina)
Cadeia de aminoácidos: Ala-Leu-Ala-Leu-Ile-Ser-Leu-Asn
Figura 1: Código Genético.
Fonte: WATSON, J. D. et al. Biologia Molecular do Gene. 7. ed. Porto Alegre: ArtMed, 2015. E-book. p.574.
REFERÊNCIAS
INSIRA as referências utilizadas, no formato ABNT, incluindo o livro da disciplina.
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